DDX23 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-407132

概要

DDX23はDEADボックス型RNAヘリカーゼをコードしており、スプライソソーム内のU5 snRNPの中核構成因子として機能し、pre-mRNAスプライシングを支えるためにRNA–タンパク質複合体のリモデリングを助けます。スプライス部位の認識やスプライソソームの動態を制御することで、DDX23は転写産物の成熟、アイソフォームのバランス、ならびに細胞周期の進行やストレス応答に関連する下流の遺伝子発現プログラムに影響を与えます。スプライソソーム関連ヘリカーゼの機能撹乱は、選択的スプライシング様式やRNAプロセシングの忠実性を変化させ得ますが、これらの過程はしばしば腫瘍性の転写リプログラミングやゲノム不安定性に関与するとされています。そのためDDX23は、RNA代謝、プロテオスタシス、そしてスプライシングとDNA損傷シグナル伝達を結び付ける経路の文脈で一般的に研究されています。

DDX23 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるDDX23遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、DDX23内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、DDX23のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、DDX23タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、DDX23シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、DDX23欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• DDX23の機能に不可欠なDDX23エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、DDX23ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• DDX23 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびDDX23 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、DDX23遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  DDX23 HDRプラスミド（h）および DDX23 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDDX23ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDDX23標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。