DDX21 Double Nickaseプラスミド (h): sc-405770-NIC

DDX21は核小体に局在するDEADボックス型RNAヘリカーゼをコードしており、rRNAの転写とプロセシング、リボソーム生合成、ならびに核小体の高次構造の形成・維持を協調的に制御する。DDX21はATP依存的にRNA–タンパク質複合体をリモデリングすることで、RNAポリメラーゼIによるrDNA転写、pre-rRNAの成熟、そしてリボソーム産生と細胞の増殖プログラムとの連携に寄与する。さらにDDX21は、RNA分子種やリボ核タンパク質複合体との相互作用を介して、mRNA翻訳や自然免疫シグナル伝達の調節にも関与すると示唆されている。DDX21に関連する核小体機能およびリボソーム生合成経路の破綻は、複数の疾患状況において観察される増殖ストレス応答や遺伝子発現プログラムの変化と関連している。

DDX21 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における DDX21 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、DDX21内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、DDX21の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、DDX21が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。