Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
DDIT3/GADD153/CHOP Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419970
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- DDIT3/GADD153/CHOP Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico DDIT3/GADD153/CHOP, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: DDIT3/GADD153/CHOP Antibody (B-3): sc-7351
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
DDIT3/GADD153/CHOP Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-419970 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Il gene murino **Ddit3** codifica **DDIT3** (noto anche come **GADD153/CHOP**), un fattore di trascrizione bZIP inducibile dallo stress che forma eterodimeri con membri della famiglia **C/EBP** per riprogrammare l’espressione genica durante lo stress cellulare. È un effettore centrale della **risposta alle proteine mal ripiegate (UPR)** a valle della segnalazione **PERK–eIF2α–ATF4** e integra lo stress del reticolo endoplasmatico con lo stress ossidativo, la privazione di nutrienti e le vie di danno al DNA. DDIT3 regola apoptosi, autofagia e controllo del ciclo cellulare, influenzando l’integrità mitocondriale e programmi trascrizionali che determinano il destino cellulare. Alterazioni dell’attività di DDIT3 sono state implicate in fenotipi infiammatori e metabolici e il gene è ampiamente utilizzato come readout meccanicistico in modelli di neurodegenerazione, stress delle cellule β correlato al diabete e adattamento allo stress nel microambiente tumorale.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO DDIT3/GADD153/CHOP (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ddit3 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ddit3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ddit3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina DDIT3/GADD153/CHOP.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ddit3 per lo studio della segnalazione di DDIT3/GADD153/CHOP, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Ddit3 critici per la funzione di DDIT3/GADD153/CHOP
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ddit3 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal DDIT3/GADD153/CHOP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal DDIT3/GADD153/CHOP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ddit3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal DDIT3/GADD153/CHOP Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR DDIT3/GADD153/CHOP (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ddit3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ddit3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.