DDI2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-427193

概要

マウスDDI2（DNA damage-inducible 1 homolog 2）は、タンパク質品質管理およびストレス応答シグナル伝達に関与するとされるアスパラギン酸プロテアーゼをコードしており、プロテアソーム機能に関連する転写プログラムのプロセシングや制御に役割を持つことが報告されています。DDI2の活性はユビキチン–プロテアソーム系（UPS）の動態や、タンパク質毒性ストレスに対する細胞適応と結び付いており、ミスフォールドまたは損傷タンパク質の分解・入れ替わりに影響します。これらの過程を介して、DDI2はストレス条件下における細胞周期の進行、アポトーシス、ゲノム安定性を制御する経路にも影響し得ます。プロテオスタシスとストレスシグナルの破綻は、神経変性、炎症、がん生物学で研究される機構とも関連するため、Ddi2はマウスモデルにおける経路解析に有用な遺伝子座です。

DDI2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるDdi2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ddi2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ddi2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、DDI2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、DDI2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ddi2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• DDI2の機能に不可欠なDdi2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ddi2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• DDI2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびDDI2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ddi2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  DDI2 HDRプラスミド（m）および DDI2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDdi2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDdi2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。