DBH CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402441

概要

ドーパミンβ-ヒドロキシラーゼ（DBH）は、銅依存性モノオキシゲナーゼをコードし、交感神経ニューロンおよび副腎髄質クロマフィン細胞の分泌小胞内で、ドーパミンをノルエピネフリンへ変換する反応を触媒します。カテコールアミン生合成を制御することで、DBHはアドレナリン作動性シグナル伝達、神経内分泌性のストレス応答、ならびに心血管トーヌスや中枢神経系の覚醒を調節する下流のGPCR介在性経路に影響を及ぼします。DBHの発現量や酵素活性の変動は、ノルエピネフリンの恒常性の変化と関連づけられており、神経精神疾患関連の表現型や自律神経機能障害の文脈で研究されています。そのためDBHは、ヒト細胞モデルにおいてカテコールアミン経路のフラックス、刺激—分泌連関、ならびに神経伝達物質バランスを解析するための有用な標的です。

DBH CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるDBH遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、DBH内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、DBHのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、DBHタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、DBHシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、DBH欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• DBHの機能に不可欠なDBHエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、DBHゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• DBH CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびDBH CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、DBH遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  DBH HDRプラスミド（h）および DBH HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDBHホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDBH標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。