DARPP-32 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h2): sc-400430-LAC-2

O gene humano PPP1R1B codifica a DARPP-32 (fosfoproteína de 32 kDa regulada por dopamina e AMPc), um integrador central de sinalização em neurônios espinhosos médios que conecta entradas dopaminérgicas e glutamatérgicas à regulação da proteína fosfatase-1 (PP1). Após fosforilação dependente de PKA, a DARPP-32 inibe a PP1 para modular redes de fosforilação a jusante que controlam a plasticidade sináptica, a excitabilidade neuronal e programas transcricionais nas vias de AMPc/PKA e de receptores de dopamina, enquanto estados alternativos de fosforilação a acoplam à calcineurina e a outras quinases. Alterações na sinalização de PPP1R1B/DARPP-32 têm sido associadas a fenótipos neuropsiquiátricos e neurodegenerativos e a sinalização oncogênica desregulada em determinados contextos tumorais, refletindo seu papel amplo no controle do estado celular dependente de fosforilação. A edição gênica de PPP1R1B dá suporte a estudos mecanísticos da transdução de sinal mediada por dopamina, do equilíbrio fosfatase/quinase e da investigação de vias em modelos neuronais e em sistemas celulares relevantes para doenças.

As Partículas de Ativação Lentivirais DARPP-32 (h2) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de PPP1R1B numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais DARPP-32 (h2) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição PPP1R1B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de DARPP-32. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo PPP1R1B e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.