DAPK Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-402702-NIC

A proteína quinase 1 associada à morte celular (DAPK1) codifica a DAPK, uma quinase de serina/treonina regulada por Ca2+/calmodulina que integra a sinalização apoptótica e autofágica com a dinâmica do citoesqueleto. A DAPK modula vias de morte celular por meio da fosforilação de múltiplos substratos, influenciando respostas ao estresse, anoikis e apoptose dependente de mitocôndrias, além de se conectar a redes de sinalização de MAPK e inflamação. Alterações na atividade ou na expressão de DAPK1 têm sido associadas à desregulação de programas de sobrevivência e migração celular, relacionando-a a processos relevantes para doenças, como supressão tumoral, sinalização de estresse ligada à neurodegeneração e lesão tecidual mediada pelo sistema imune. Como regulador nodal da morte celular programada, a DAPK1 é frequentemente estudada para dissecar a comunicação cruzada entre vias que molda decisões de destino celular sob estresse genotóxico, oxidativo ou por citocinas.

DAPK O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus DAPK1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de DAPK1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função DAPK1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com DAPK1 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.