Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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DAP12 Plasmide Double Nickase (h): sc-400916-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- DAP12 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il DAP12 Double Nickase Plasmid (h) e il DAP12 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira TYROBP. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: DAP12 Antibody (G-5): sc-133174
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
DAP12 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400916-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DAP12 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400916-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene umano **TYROBP** codifica **DAP12** (noto anche come TYROBP), un adattatore transmembrana che collega la segnalazione degli immunorecettori all’attivazione intracellulare tramite il suo motivo **ITAM**. DAP12 si associa a recettori come **TREM2**, **SIRPβ1** e diversi **KIR** attivatori per innescare vie dipendenti da **SYK** che regolano fagocitosi, produzione di citochine, rimodellamento del citoscheletro e maturazione delle cellule dell’immunità innata. È altamente espresso nelle cellule della linea mieloide, incluse macrofagi, microglia, cellule dendritiche e osteoclasti, fungendo da collegamento tra segnali extracellulari e programmi infiammatori e omeostatici. Alterazioni genetiche della segnalazione TYROBP-DAP12 sono state associate a meccanismi neuroinfiammatori e all’osteoimmunologia, con rilevanza per patologie come la malattia di Nasu–Hakola e, più in generale, per contesti di disfunzione microgliale.
DAP12 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TYROBP nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TYROBP. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TYROBP. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TYROBP interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.