Cytokeratin 6B Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401651-ACT

KRT6B codifica a citoqueratina 6B, uma proteína de filamento intermediário do tipo II que forma heterodímeros com queratinas do tipo I para compor o citoesqueleto de queratina em epitélios estratificados. A citoqueratina 6B contribui para a resistência mecânica, a organização do citoesqueleto e processos de remodelação epitelial ligados à reparação de feridas e às respostas ao stresse, integrando-se com complexos juncionais e programas de sinalização que coordenam diferenciação e proliferação. Alterações na expressão de KRT6B são observadas em estados de queratinização hiperproliferativa e em patologias epiteliais, sendo frequentemente usada como marcador de queratinócitos ativados na pele e em tecidos mucosos. Essas características tornam o KRT6B relevante para estudar a homeostase epitelial, a função de barreira e alterações associadas ao citoesqueleto em modelos relevantes de doença.

Cytokeratin 6B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de KRT6B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Cytokeratin 6B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus KRT6B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição KRT6B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Cytokeratin 6B. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus KRT6B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Cytokeratin 6B no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Cytokeratin 6B em células tumorais com expressão de KRT6B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.