Plásmido Doble Nickase (h) Cytokeratin 3: sc-402161-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Cytokeratin 3 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Cytokeratin 3 (h) y el plásmido de doble nickasa Cytokeratin 3 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a KRT3. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Cytokeratin 3 | sc-402161-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Cytokeratin 3 | sc-402161-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KRT3 codifica la citoqueratina 3, una proteína de filamento intermedio de tipo II que forma heteropolímeros obligatorios con la queratina 12 para construir la red del citoesqueleto de las células epiteliales corneales. Este sistema de filamentos aporta resistencia mecánica, mantiene la arquitectura epitelial y contribuye a procesos como la diferenciación celular, la migración y la reparación de heridas mediante una regulación coordinada del citoesqueleto y de las uniones celulares. La expresión alterada o la disrupción estructural de queratinas enriquecidas en la córnea se asocia con fenotipos de fragilidad epitelial y patología de la superficie corneal, lo que convierte a KRT3 en un marcador útil y en un nodo funcional para estudiar la homeostasis del epitelio ocular. Además, la remodelación de la red de queratinas se cruza con vías de respuesta al estrés y con la señalización asociada al citoesqueleto que influyen en la integridad de la barrera y la regeneración tisular.
Cytokeratin 3 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus KRT3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de KRT3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de KRT3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con KRT3 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.