Cytokeratin 16 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-403138-NIC

KRT16 codifica a citoqueratina 16, uma proteína de filamento intermédio do tipo I que forma heterodímeros com queratinas do tipo II para construir o citoesqueleto de queratina em epitélios estratificados. A citoqueratina 16 é rapidamente induzida durante estados de ativação epidérmica, sustentando a resiliência mecânica, a remodelação do citoesqueleto e alterações coordenadas na proliferação e migração de queratinócitos durante o stresse da barreira e programas associados à cicatrização. Interage com processos de adesão e de resposta ao stresse, incluindo a organização citoesqueleto–desmossoma e a dinâmica da rede de queratina que moldam a integridade epitelial. A expressão desregulada de KRT16 ou a montagem dos filamentos está associada a fenótipos cutâneos hiperproliferativos e perturbações da queratinização, tornando-o um alvo útil para estudar a sinalização de stresse epitelial e a remodelação do citoesqueleto associada à diferenciação.

Cytokeratin 16 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus KRT16 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de KRT16. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função KRT16. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com KRT16 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.