CyPB CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401888-ACT

PPIB kodiert Cyclophilin B (CyPB), eine im endoplasmatischen Retikulum (ER) lokalisierte Peptidyl‑Prolyl‑cis‑trans‑Isomerase, die die Proteinfaltung beschleunigt und die Proteostase des sekretorischen Weges unterstützt. CyPB ist an der ER‑Qualitätskontrolle und an Stressantworten beteiligt, unter anderem durch die Koordination von Chaperon‑Netzwerken und die Modulation calciumabhängiger Prozesse, die die zelluläre Homöostase beeinflussen. Über seine Isomeraseaktivität und seine Interaktionen mit Faltungssubstraten verknüpft PPIB die Proteinreifung mit Signalwegen, die die Produktion der extrazellulären Matrix, inflammatorische Signalgebung und Entscheidungen zum Zellüberleben steuern. Eine dysregulierte PPIB/CyPB‑Aktivität oder ‑Expression wurde mit pathologischen Kontexten in Verbindung gebracht, die mit abweichender Proteinverarbeitung, Immunaktivierung und Gewebeumbau einhergehen, was PPIB für mechanistische Untersuchungen in Krankheitsmodellen relevant macht.

CyPB Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen PPIB-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CyPB Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des PPIB-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der PPIB-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CyPB-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native PPIB-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CyPB-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CyPB-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem PPIB-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.