CYP51A1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419931

概要

マウスのCyp51は、シトクロムP450酵素であるCYP51A1（ラノステロール14α-脱メチル化酵素）をコードしている。これは高度に保存されたモノオキシゲナーゼであり、スクアレン以降のメバロン酸／ステロール生合成経路において、コレステロールおよびその他のステロールへ至る重要な反応段階を触媒する。ステロール中間体のフラックスを制御することで、CYP51A1は膜組成、脂質ラフト依存的シグナル伝達、ならびに細胞恒常性を調節するステロール由来代謝産物の利用可能性に影響を与える。ステロール生合成の攪乱は増殖、分化、ストレス応答の変化と関連するため、Cyp51は代謝リプログラミングや臓器特異的な脂質需要を研究するうえで有用な結節点となる。マウスモデルでは、Cyp51を操作することで、コレステロール経路の制御機構と、それが発生および代謝表現型に与える寄与を機序的に検討できる。

CYP51A1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるCyp51遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Cyp51内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Cyp51のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CYP51A1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CYP51A1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Cyp51欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CYP51A1の機能に不可欠なCyp51エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Cyp51ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CYP51A1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびCYP51A1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Cyp51遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CYP51A1 HDRプラスミド（m）および CYP51A1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCyp51ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCyp51標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。