Plasmide CRISPR d'Activation (m) CYP4X1: sc-429886-ACT

Le gène murin **Cyp4x1** code **CYP4X1**, une monooxygénase du cytochrome P450 impliquée dans le métabolisme oxydatif des acides gras et d’autres substrats dérivés des lipides. En tant que membre de la famille **CYP4**, **CYP4X1** est associée à des voies qui régulent l’homéostasie des médiateurs lipidiques, l’équilibre rédox et le remodelage des lipides membranaires, des processus susceptibles d’influencer la signalisation inflammatoire ainsi que la physiologie vasculaire ou neuronale. Des modifications de l’activité des cytochromes P450 sont fréquemment liées à des changements des réponses au stress oxydatif et de la production de lipides bioactifs, ce qui fait de **Cyp4x1** une cible utile pour des études mécanistiques de la régulation métabolique. Dans des modèles murins, la modulation de la fonction de **CYP4X1** peut soutenir l’étude de la manière dont les voies d’oxydation des lipides façonnent une physiologie spécifique des tissus et des phénotypes pertinents pour la maladie, sans pour autant suggérer des retombées cliniques.

CYP4X1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Cyp4x1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CYP4X1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Cyp4x1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Cyp4x1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CYP4X1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Cyp4x1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CYP4X1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CYP4X1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Cyp4x1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.