Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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CYP3A5 Double Nickaseプラスミド (h): sc-401306-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- CYP3A5 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- CYP3A5ダブルニカースプラスミド（h）およびCYP3A5ダブルニカースプラスミド（h2）は、CYP3A5を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: CYP3A5 抗体 (F18 P3 B6): sc-53616
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
CYP3A5 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-401306-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CYP3A5 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-401306-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CYP3A5は、さまざまな外因性化合物（キセノバイオティクス）および内因性基質の酸化的代謝を触媒するシトクロムP450モノオキシゲナーゼをコードしており、小胞体における第I相の生体内変換に寄与する。肝臓および肝外組織の薬物代謝酵素ネットワークの一部として、CYP3A5はステロイドおよび脂質の恒常性を制御する経路や、環境化学物質のクリアランスに関わる経路に影響を及ぼす。CYP3A5の発現量と活性の個体差は代謝表現型を規定する主要因であり、細胞モデルやオルガノイドモデルにおいてCYP3A基質への曝露量を変化させ得る。CYP3A5依存的代謝の異常は、毒性物質への感受性や、疾患に伴う肝機能の変化、炎症関連の転写プログラムの変動といった文脈で検討されてきた。
CYP3A5 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CYP3A5 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CYP3A5内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CYP3A5の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CYP3A5が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。