Plásmido Doble Nickase (h) CYP1A2: sc-401178-NIC

CYP1A2 codifica una monooxigenasa hepática del citocromo P450 que cataliza el metabolismo oxidativo de compuestos endógenos y de numerosos xenobióticos, incluida la cafeína y otros sustratos aromáticos. Como parte del metabolismo de fármacos de Fase I, la actividad de CYP1A2 configura las vías de bioactivación y depuración al generar metabolitos más polares e intermediarios reactivos que pueden influir en el estrés oxidativo y en la homeostasis redox celular. Su expresión está regulada por programas transcripcionales de detección de xenobióticos, en particular la señalización del receptor de hidrocarburos de arilo (AHR), lo que vincula las exposiciones ambientales con la reprogramación metabólica. La variación interindividual en la función y la regulación de CYP1A2 se estudia ampliamente por su impacto en fenotipos farmacocinéticos, la susceptibilidad a sustancias químicas y la biología hepática asociada al metabolismo.

CYP1A2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CYP1A2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CYP1A2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CYP1A2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CYP1A2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.