Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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CYP17A1 Double Nickase Plasmid (h): sc-401918-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CYP17A1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CYP17A1 Double-Nickase-Plasmid (h) und CYP17A1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CYP17A1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: CYP17A1: sc-374244
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CYP17A1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401918-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CYP17A1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401918-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CYP17A1 kodiert Cytochrom P450 17A1, eine mikrosomale Monooxygenase, die die für die Steroidogenese zentralen Reaktionen der 17α‑Hydroxylase und der 17,20‑Lyase katalysiert. Durch die Umwandlung von Pregnenolon und Progesteron in 17‑hydroxylierte Zwischenprodukte und die anschließende Bildung von Dehydroepiandrosteron und Androstendion trägt CYP17A1 dazu bei, den Stofffluss durch die Biosynthesewege von Glukokortikoiden und Sexualsteroiden zu regulieren. Seine Aktivität ist an den Elektronentransfer durch die P450‑Oxidoreduktase im endoplasmatischen Retikulum gekoppelt und beeinflusst endokrine Rückkopplungskreise, die die Hormonproduktion in Nebenniere und Gonaden steuern. Eine Fehlregulation der Funktion oder Expression von CYP17A1 wird mit Phänotypen eines Steroidhormon-Ungleichgewichts in Verbindung gebracht und bietet einen mechanistischen Ansatzpunkt, um stoffwechselgekoppelte Signalwege in endokrinologischen Krankheitsmodellen zu untersuchen.
CYP17A1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CYP17A1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CYP17A1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CYP17A1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CYP17A1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.