cyclin Y CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-426856

概要

マウスCcnyは、膜結合型サイクリンであるサイクリンYをコードしており、細胞周期に連動したシグナル伝達を発生および代謝プログラムと協調させます。サイクリンYはCDK活性の制御に関与し、細胞膜上のシグナル伝達構成要素を制御することでWnt/β-カテニン経路の調節を促進し、増殖・分化・組織恒常性に影響を及ぼすことが示唆されています。Ccnyの発現やサイクリン駆動型シグナル伝達のダイナミクスは、幹／前駆細胞の挙動、神経発生、組織リモデリングなどの文脈で研究されており、これらの場面では細胞周期制御の破綻とWntシグナル異常が共通して見られます。そのため、Ccnyの機能喪失モデルは、サイクリン依存的チェックポイント制御、経路間クロストーク、ならびにがん生物学や神経発達研究に関連する表現型の解明に有用です。

cyclin Y CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるCcny遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ccny内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ccnyのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、cyclin Yタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、cyclin Yシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ccny欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• cyclin Yの機能に不可欠なCcnyエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ccnyゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• cyclin Y CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびcyclin Y CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ccny遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  cyclin Y HDRプラスミド（m）および cyclin Y HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCcnyホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCcny標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。