CXXC5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403248-ACT

A CXXC5 humana (proteína 5 com dedo de zinco do tipo CXXC) é um regulador nuclear que se liga a DNA rico em CpG e modula programas de transcrição que governam decisões de destino celular. É mais conhecida como um componente de feedback negativo dependente do contexto da sinalização Wnt/β-catenina por meio da interação com Dishevelled, influenciando assim proliferação e diferenciação. A CXXC5 também tem sido associada à regulação epigenética e a vias responsivas ao estresse, contribuindo para o controle do desenvolvimento hematopoético e neural. A desregulação da expressão de CXXC5 ou da integração de sinais em que ela participa tem sido associada a estados de diferenciação alterados e a fenótipos proliferativos observados em diferentes contextos de pesquisa em câncer e doenças do desenvolvimento.

CXXC5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CXXC5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CXXC5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CXXC5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CXXC5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CXXC5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CXXC5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CXXC5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CXXC5 em células tumorais com expressão de CXXC5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.