Plásmido CRISPR de Activación (h) CXCR-7: sc-403187-ACT

ACKR3 (CXCR-7) codifica un receptor atípico de quimiocinas que se une a CXCL12/SDF-1 y CXCL11, y funciona principalmente como depurador (scavenger) de ligandos y modulador de la señalización, más que como un receptor quimiotáctico canónico acoplado a Gαi. Al moldear los gradientes de quimiocinas y el diálogo cruzado entre receptores, CXCR-7 influye en programas dependientes de CXCR4 relacionados con migración, supervivencia y adhesión, e impacta en vías posteriores, incluidas MAPK/ERK y la señalización asociada a β-arrestina. En tejidos humanos, ACKR3 contribuye a la dinámica del tráfico vascular y de células inmunitarias, y se investiga con frecuencia en contextos como inflamación, invasión tumoral, biología de la metástasis y angiogénesis. Su expresión y actividad también se estudian en el desarrollo y la remodelación tisular, donde la disponibilidad de quimiocinas es un factor limitante para el posicionamiento celular.

CXCR-7 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ACKR3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CXCR-7 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ACKR3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ACKR3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CXCR-7. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ACKR3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CXCR-7 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CXCR-7 en células tumorales con expresión de ACKR3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.