CXCR-3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401933-ACT

CXCR3はケモカイン受容体CXCR-3をコードしており、CXCR-3はGタンパク質共役型受容体（GPCR）として、CXCL9、CXCL10、CXCL11などのインターフェロン誘導性リガンドに結合し、活性化T細胞、NK細胞、その他の免疫細胞サブセットの方向性を持った遊走を統合的に制御します。CXCR-3シグナルは、Giを介したcAMP制御、PI3K–AKT、MAPK/ERK、細胞内カルシウムフラックスなどの下流GPCR経路を作動させ、炎症組織における走化性、接着、エフェクター分化（極性化）を形作ります。白血球のトラフィッキングと免疫細胞の局在制御における役割から、CXCR3は慢性炎症性微小環境、自己免疫、移植免疫生物学、腫瘍免疫コンテクスト（腫瘍微小環境における免疫状態）において広く研究されています。CXCR-3軸の活性異常は、免疫細胞浸潤、サイトカイン駆動性の組織リモデリング、ならびにインターフェロン関連の転写プログラムを規定する要因として、しばしば評価されています。

CXCR-3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CXCR3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CXCR-3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CXCR3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCXCR3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CXCR-3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCXCR3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCXCR-3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCXCR3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCXCR-3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。