CTR1 Plasmide Double Nickase (h): sc-417947-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CTR1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CTR1 Double Nickase Plasmid (h) e il CTR1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira SLC31A1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CTR1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-417947-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CTR1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-417947-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SLC31A1 codifica il trasportatore di rame ad alta affinità CTR1, una proteina della membrana plasmatica che media l’assorbimento cellulare di ioni rame, necessari per l’attività di enzimi cupro-dipendenti essenziali. Controllando la disponibilità intracellulare di rame, CTR1 influenza l’omeostasi redox, la respirazione mitocondriale e le risposte allo stress ossidativo, e contribuisce alla regolazione di vie di segnalazione e percorsi metabolici dipendenti dai metalli. Un’alterazione della funzione di SLC31A1/CTR1 può compromettere l’equilibrio del rame, modificare la capacità antiossidante e incidere su vie legate alla proteostasi e alla vitalità cellulare. In ambito di ricerca, una deregolazione del trasporto del rame e dell’espressione di CTR1 è stata associata a fenotipi di omeostasi dei metalli alterata, rilevanti per la neurodegenerazione, la biologia epatica e il metabolismo delle cellule tumorali.
CTR1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SLC31A1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SLC31A1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SLC31A1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SLC31A1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.