CtIP Plasmide Double Nickase (h): sc-401292-NIC

RBBP8 codifica CtIP, un fattore conservato coinvolto nella resezione delle estremità del DNA che coordina l’avvio della ricombinazione omologa promuovendo l’elaborazione 5′–3′ delle rotture a doppio filamento e facilitando il caricamento di RAD51. CtIP agisce all’interfaccia tra la segnalazione del danno al DNA e il controllo del ciclo cellulare, integrandosi con vie dipendenti da BRCA1 e dal complesso MRN per regolare l’attivazione dei checkpoint, la stabilità delle forcelle di replicazione e la scelta della via di riparazione tra ricombinazione omologa e giunzione alternativa delle estremità. Grazie al suo ruolo nel mantenimento dell’integrità del genoma, un’attività alterata di CtIP è associata a instabilità cromosomica ed è stata studiata nel contesto della biologia del cancro e delle reti di geni oncosoppressori. La resezione dipendente da CtIP influenza anche la ricombinazione di switch di classe e altri processi programmati di rottura del DNA, rendendo RBBP8 un nodo chiave per lo studio della fedeltà della riparazione e della mutagenesi.

CtIP Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus RBBP8 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di RBBP8. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di RBBP8. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con RBBP8 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.