CtIP Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-401292-NIC

RBBP8 codifica a CtIP, um fator conservado de resecção das extremidades do DNA que coordena o início da recombinação homóloga ao promover o processamento 5′–3′ de quebras de dupla fita e facilitar o carregamento de RAD51. CtIP atua na interface entre a sinalização de dano ao DNA e o controle do ciclo celular, integrando-se a vias dependentes de BRCA1 e do complexo MRN para regular a ativação de checkpoints, a estabilidade das forquilhas de replicação e a escolha da via de reparo entre recombinação homóloga e união alternativa de extremidades. Por seu papel na manutenção da integridade do genoma, alterações na atividade de CtIP estão associadas à instabilidade cromossômica e têm sido investigadas no contexto da biologia do câncer e de redes de supressores tumorais. A resecção dependente de CtIP também influencia a recombinação de troca de classe e outros processos programados de quebras no DNA, tornando RBBP8 um nó-chave para estudar a fidelidade do reparo e a mutagênese.

CtIP O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus RBBP8 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de RBBP8. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função RBBP8. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com RBBP8 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.