CSN8 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-409800-ACT

COPS8はCSN8をコードしており、CSN8はカリン‐RING型ユビキチンリガーゼ（CRL）の活性を脱NEDD8化（deneddylation）によって制御するCOP9シグナロソームの中核サブユニットです。これにより、ユビキチン依存的なタンパク質分解・代謝回転（ターンオーバー）が調節されます。CSN8は、主要な細胞周期制御因子、DNA損傷応答因子、ストレスシグナル伝達の中間因子の安定性を制御することで、プロテオスタシス（タンパク質恒常性）、増殖、環境刺激への適応を協調的に制御します。CSN8の機能はアポトーシス、オートファジー、炎症シグナルに関連する経路とも交差しており、COP9シグナロソーム活性が細胞恒常性の維持において中心的役割を担うことを示しています。CSN8に関連するユビキチンシグナルが破綻すると、異常な細胞周期進行、プロテアソーム機能の変化、ストレス経路の不均衡といった疾患関連メカニズムに関与しうることが、複数の組織コンテキストで示唆されています。

CSN8 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性COPS8の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CSN8 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における COPS8 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCOPS8転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CSN8の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCOPS8遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCSN8依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCOPS8発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCSN8経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。