CRSP77 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402693-ACT

MED17はCRSP77をコードしており、CRSP77はヒトMediator複合体の中核サブユニットの一つである。Mediator複合体は、配列特異的な転写因子とRNAポリメラーゼIIを連結し、転写開始およびプロモーター特異的な遺伝子制御を協調的に調節する。Mediator依存的にシグナル入力を統合することを通じて、CRSP77は細胞周期プログラム、分化、ならびにストレス応答性の転写出力の制御に寄与する。MED17を含むMediator構成因子の機能異常は、全体的な転写恒常性の変化と関連づけられており、神経発生および増殖性疾患の機構という文脈でも検討されてきた。その結果、MED17/CRSP77は、転写コレギュレーターが経路特異的な遺伝子発現ネットワークをどのように形成するのかを理解するための研究対象としてしばしば用いられている。

CRSP77 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MED17の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CRSP77 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MED17 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMED17転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CRSP77の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMED17遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCRSP77依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMED17発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCRSP77経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。