CRIM1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-424480-ACT

Crim1 codifica o regulador transmembranar rico em cisteína de BMP 1 (CRIM1), uma proteína transmembranar do tipo I que se liga e modula a maturação, o tráfego e a disponibilidade de sinalização de fatores de crescimento secretados, incluindo membros da superfamília BMP/TGF-β. Em tecidos de camundongo, o CRIM1 contribui para programas de desenvolvimento, como a angiogênese e a morfogênese de órgãos, ao moldar gradientes extracelulares de ligantes e respostas transcricionais a jusante dependentes de SMAD. Também está implicado em interações célula–célula e célula–matriz que influenciam o comportamento epitelial e endotelial, conectando-o a vias que controlam proliferação, diferenciação e padronização tecidual. A atividade desregulada de CRIM1 tem sido associada a fenótipos relevantes para defeitos do desenvolvimento e estados de sinalização ligados à fibrose e ao câncer, tornando-o um ponto útil para estudos mecanísticos de sinalização por fatores de crescimento.

CRIM1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Crim1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CRIM1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Crim1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Crim1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CRIM1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Crim1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CRIM1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CRIM1 em células tumorais com expressão de Crim1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.