CPSF2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407012

Visão geral

CPSF2 (fator de especificidade de clivagem e poliadenilação, subunidade 2) é um componente central da maquinaria mamífera de processamento da extremidade 3′ do mRNA que contribui para o reconhecimento de sinais de poliadenilação e para a montagem do complexo de clivagem e poliadenilação. Por meio do seu papel na clivagem do pré‑mRNA e na adição da cauda poli(A), o CPSF2 influencia a maturação dos transcritos, a estabilidade do mRNA e a eficiência de tradução, moldando assim programas globais de expressão gênica. O processamento dependente de CPSF2 na extremidade 3′ também se conecta à terminação da transcrição e à poliadenilação alternativa, processos que remodelam o transcriptoma durante a proliferação e a diferenciação. A desregulação da formação da extremidade 3′ e da seleção de sítios de poliadenilação é observada com frequência em estados de expressão associados a doenças, tornando o CPSF2 um ponto útil para investigar fenótipos de processamento de RNA e seus efeitos celulares a jusante.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO CPSF2 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene CPSF2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do CPSF2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do CPSF2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína CPSF2.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de CPSF2 para a investigação da sinalização de CPSF2, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) CPSF2 críticos para a função CPSF2
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos CPSF2 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo CPSF2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo CPSF2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus CPSF2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo CPSF2 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR CPSF2 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia CPSF2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo CPSF2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.