CPS1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402014-ACT

ヒトCPS1はカルバモイルリン酸合成酵素1（CPS1）をコードしており、ミトコンドリアに局在するこの酵素は、ATPを用いてアンモニアと重炭酸をカルバモイルリン酸に変換することで、尿素回路における最初の不可逆的（コミットメント）段階を触媒する。この活性は肝臓における窒素排泄の中核を担い、アミノ酸分解代謝、ミトコンドリア代謝、および下流のアルギニン生合成とも交差する。CPS1の発現や機能の変化は高アンモニア血症や、より広範な代謝恒常性の破綻と関連しており、CPS1の状態は肝生理、ミトコンドリアのストレス応答、窒素バランスに関する研究でしばしば評価される。がん研究や代謝研究においても、CPS1は代謝リプログラミングや系譜（リネージ）に関連した尿素回路活性を示す、状況依存的なマーカーとして用いられる。

CPS1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CPS1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CPS1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CPS1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCPS1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CPS1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCPS1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCPS1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCPS1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCPS1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。