CPI-17 Lentiviral Activation Particles (h): sc-401966-LAC

PPP1R14A kodiert CPI-17, einen phosphorylierungsabhängigen Inhibitor der Myosin-Leichtketten-Phosphatase (MLCP/PP1), der kontraktile Signale verstärkt, indem er die Phosphorylierung der regulatorischen Myosin-Leichtkette aufrechterhält. Nach Aktivierung durch PKC- sowie RhoA/ROCK-gekoppelte Signale integriert CPI-17 Ca²⁺-Sensitivierungswege, um den Tonus der glatten Muskulatur, die zytoskelettale Spannung und die Aktomyosin-Dynamik zu modulieren. Dieser Regulationsknoten beeinflusst GPCR-vermittelte Kontraktilität, Zellmigration und Barriereigenschaften in vaskulären und viszeralen Geweben. Eine fehlregulierte PPP1R14A/CPI-17-Signalgebung wurde mit veränderter Hyperkontraktilität glatter Muskulatur und Umbauprozessen in Verbindung gebracht, die für die Biologie kardiovaskulärer und Atemwegserkrankungen relevant sind, was seine Nutzung als mechanistischen Ansatzpunkt in Studien zur Signalgebung und Gewebephysiologie unterstützt.

CPI-17 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente PPP1R14A-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

CPI-17 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der PPP1R14A-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen CPI-17-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen PPP1R14A-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.