Cortactin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400761-ACT

O CTTN humano codifica a cortactina, um substrato de Src e um andaime ligante de F-actina que promove a montagem de actina ramificada dependente de Arp2/3 e estabiliza redes dinâmicas de actina no córtex celular. A cortactina coordena a sinalização de receptores tirosina-quinase e de quinases da família Src com a remodelação do citoesqueleto por meio de interações com N-WASP, cofilina e adaptadores endocíticos, influenciando a formação de lamelipódios, a renovação de adesões focais e o tráfego vesicular. Por esses processos, o CTTN está intimamente ligado à migração celular, a comportamentos do tipo invasivo e à mecanotransdução, e sua desregulação tem sido associada a programas de motilidade alterados e a fenótipos de progressão tumoral. Como resultado, o CTTN é frequentemente estudado em vias que regulam a dinâmica da actina, a endocitose e as interações com a matriz extracelular.

Cortactin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CTTN sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Cortactin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CTTN em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CTTN, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Cortactin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CTTN nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Cortactin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Cortactin em células tumorais com expressão de CTTN silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.