Plasmide CRISPR d'Activation (h) Corin: sc-404362-ACT

Le gène humain **CORIN** code la corine, une protéase à sérine transmembranaire de type II fortement exprimée dans les cardiomyocytes, où elle active par protéolyse le pro-peptide natriurétique atrial et le pro-peptide natriurétique de type B (BNP) en hormones natriurétiques matures. Via cet axe de maturation des peptides natriurétiques, la corine influence la signalisation dépendante du cGMP, l’homéostasie du sodium et de l’eau, le tonus vasculaire et les réponses de remodelage cardiaque au stress hémodynamique. L’activité de CORIN s’inscrit à l’interface de la protéolyse extracellulaire et de la régulation des protéases ancrées à la membrane, avec des répercussions sur des programmes transcriptionnels en aval qui façonnent les voies de l’hypertrophie et de la fibrose. Des altérations génétiques et d’expression de **CORIN** ont été associées à une dérégulation de la signalisation des peptides natriurétiques et à des phénotypes cardiovasculaires, ce qui étaye sa pertinence dans les études mécanistiques de la fonction cardiaque et de la régulation de la pression artérielle.

Corin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CORIN sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Corin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CORIN dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CORIN, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Corin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CORIN natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Corin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Corin dans les cellules tumorales présentant une expression de CORIN silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.