CRISPRデータではありません：画像はCRISPR実験結果を可視化するための抗体の品質を示しています。
CRISPRデータではありません：画像はCRISPR実験結果を可視化するための抗体の品質を示しています。
connexin 32 Double Nickaseプラスミド (h): sc-402378-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- connexin 32 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- connexin 32ダブルニカースプラスミド（h）およびconnexin 32ダブルニカースプラスミド（h2）は、GJB1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: connexin 32 抗体 (HAM8): sc-21794
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
connexin 32 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-402378-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
connexin 32 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-402378-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GJB1はコネキシン32（Cx32）をコードしており、Cx32はギャップ結合チャネルを構成するタンパク質で、細胞間にイオンや小分子代謝産物が通過できる経路を形成し、隣接する細胞同士の電気的・代謝的カップリングを可能にします。Cx32は髄鞘形成シュワン細胞やその他の上皮組織で顕著に発現し、シグナル伝達、レドックス恒常性、損傷応答を協調させることで組織の恒常性維持を支えています。ギャップ結合を介した細胞間コミュニケーションの調節を通じて、コネキシン32は膜興奮性、細胞分化、ストレスシグナル伝達経路などの過程に影響を及ぼします。GJB1の遺伝学的変化は遺伝性末梢神経障害と強く関連しており、髄鞘維持機構や細胞間コミュニケーション障害の解明に向けた機構研究の重要な標的となっています。
connexin 32 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における GJB1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、GJB1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、GJB1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、GJB1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。