Partículas Lentivirales de Activación (h) COLEC11: sc-413098-LAC

COLEC11 codifica la colectina-11, una lectina tipo C secretada de reconocimiento de patrones que se une a motivos de carbohidratos microbianos y de “propio alterado” para favorecer la vigilancia inmunitaria innata. Al formar complejos con proteasas MASP, COLEC11 puede iniciar la activación del complemento por la vía de las lectinas, influyendo en la opsonización, la señalización inflamatoria y la eliminación de restos apoptóticos. La actividad de COLEC11 se entrecruza con interacciones de la matriz extracelular y procesos del desarrollo, y la alteración de componentes de la vía de las lectinas se asocia con desregulación inmunitaria y susceptibilidad a infecciones. La variación genética en COLEC11 también se ha vinculado a fenotipos del desarrollo, lo que respalda su uso en estudios de biología del complemento, interacciones huésped–patógeno y homeostasis tisular.

Las partículas de activación lentiviral COLEC11 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de COLEC11 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral COLEC11 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción COLEC11, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de COLEC11. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo COLEC11 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.