CNP-53 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-403527

概要

NPPCはC型ナトリウム利尿ペプチド（CNP）をコードしており、CNP-53アイソフォームは生理活性をもつ分泌ペプチドで、主としてナトリウム利尿ペプチド受容体2（NPR2／グアニリルシクラーゼB）を介してシグナル伝達し、細胞内cGMPを増加させます。この経路は軟骨内骨化と軟骨恒常性を制御し、血管緊張および内皮機能を調節するとともに、線維芽細胞の活動や細胞外マトリックスのリモデリングにも影響します。CNP/NPR2シグナルはMAPK経路や一酸化窒素（NO）–cGMPネットワークとクロストークし、間葉系および血管系の細胞型における増殖・分化プログラムを形成します。NPPC活性の破綻は、成長板や骨格発生に関わる表現型に加え、疾患モデル化に関連する心代謝および線維化過程とも関連付けられています。

CNP-53 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるNPPC遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、NPPC内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、NPPCのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CNP-53タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CNP-53シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、NPPC欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CNP-53の機能に不可欠なNPPCエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、NPPCゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CNP-53 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびCNP-53 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、NPPC遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CNP-53 HDRプラスミド（h）および CNP-53 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはNPPCホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のNPPC標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。