CNOX Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-412433

Visão geral

ENOX1 codifica o trocador dissulfeto–tiol ecto-NOX CNOX, uma oxidorredutase associada à membrana plasmática que acopla a troca de dissulfetos proteicos à oxidação de NADH e contribui para a homeostase redox na superfície celular. A atividade de ENOX1 tem sido associada à regulação da transferência extracelular de elétrons, à modulação do equilíbrio de espécies reativas de oxigênio (ROS) e à coordenação de processos redox oscilatórios relacionados ao crescimento, que podem influenciar a proliferação e a adaptação metabólica. Por seus papéis na sinalização redox e no transporte de elétrons associado à membrana, ENOX1 é estudado em contextos de resposta ao estresse oxidativo, biologia vascular e fenótipos celulares associados a alterações no controle redox. A desregulação da expressão ou da atividade de ENOX1 foi relatada em múltiplos programas transcricionais associados a doenças, sustentando sua utilidade como um nó mecanístico para investigar sinalização dependente de redox e reprogramação metabólica em células humanas.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO CNOX (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene ENOX1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do ENOX1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do ENOX1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína CNOX.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de ENOX1 para a investigação da sinalização de CNOX, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) ENOX1 críticos para a função CNOX
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos ENOX1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo CNOX Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo CNOX Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus ENOX1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo CNOX Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR CNOX (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia ENOX1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo ENOX1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.