CNK1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403355-ACT

CNKSR1はCNK1をコードしており、CNK1は多ドメイン型の足場（スキャフォールド）タンパク質として、受容体型チロシンキナーゼからRAS–RAF–MEK–ERKカスケードや、その他のMAPK依存性プログラムへと至るシグナル伝播を統合・調整します。RAFキナーゼ、RAS経路の制御因子、細胞骨格成分を含む複合体を編成することで、CNK1は増殖、分化、細胞形態に影響を与え、PI3K/AKTシグナルとのクロストークも調節し得ます。CNK1の機能は、状況依存的な腫瘍性RASシグナルの制御と関連づけられており、複数のがんモデルで発現変動や経路カップリングの変化が報告されています。これらの特性により、CNKSR1はヒト細胞における経路配線、フィードバック制御、足場タンパク質によるシグナル特異性を解析するうえで有用な結節点となります。

CNK1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CNKSR1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CNK1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CNKSR1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCNKSR1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CNK1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCNKSR1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCNK1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCNKSR1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCNK1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。