CLPTM1L Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-408971-ACT

CLPTM1L (proteína transmembranar 1-like associada a lábio leporino e fenda palatina) codifica uma proteína de membrana multipasse que se localiza predominantemente em compartimentos de membrana intracelulares e tem sido associada à regulação da sobrevivência celular sob estresse. Estudos funcionais relacionam o CLPTM1L à sinalização apoptótica, às respostas ao estresse oxidativo e à modulação de vias que influenciam a proliferação e a tolerância a danos no DNA. Evidências genéticas e de expressão conectam o CLPTM1L a loci de suscetibilidade ao câncer e à biologia tumoral, em que a atividade alterada tem sido correlacionada com mudanças na quimiorresistência e em fenótipos de sobrevivência. Como resultado, o CLPTM1L é comumente investigado em modelos de transformação oncogênica, adaptação ao estresse e mecanismos que governam decisões de destino celular.

CLPTM1L O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CLPTM1L sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CLPTM1L O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CLPTM1L em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CLPTM1L, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CLPTM1L. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CLPTM1L nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CLPTM1L no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CLPTM1L em células tumorais com expressão de CLPTM1L silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.