Plásmido CRISPR de Activación (h) CLPTM1L: sc-408971-ACT

CLPTM1L (proteína transmembrana 1 tipo CLPTM1L asociada a labio y paladar hendido) codifica una proteína de membrana multipaso que se localiza predominantemente en compartimentos de membrana intracelulares y se ha relacionado con la regulación de la supervivencia celular bajo estrés. Los estudios funcionales asocian CLPTM1L con la señalización apoptótica, las respuestas al estrés oxidativo y la modulación de vías que influyen en la proliferación y la tolerancia al daño del ADN. La evidencia genética y de expresión vincula CLPTM1L con loci de susceptibilidad al cáncer y con la biología tumoral, donde la actividad alterada se ha correlacionado con cambios en la quimiorresistencia y en fenotipos de supervivencia. En consecuencia, CLPTM1L se investiga con frecuencia en modelos de transformación oncogénica, adaptación al estrés y mecanismos que gobiernan las decisiones sobre el destino celular.

CLPTM1L El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CLPTM1L sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CLPTM1L El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CLPTM1L en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CLPTM1L, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CLPTM1L. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CLPTM1L y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CLPTM1L en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CLPTM1L en células tumorales con expresión de CLPTM1L silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.