CLN5 Double Nickaseプラスミド (h): sc-408473-NIC

CLN5は可溶性のリソソーム糖タンパク質をコードしており、エンドリソソーム輸送やプロテオスタシスに関与して、リソソーム機能の維持および細胞内高分子の適切な分解・更新を支えます。CLN5の活性は、オートファジー—リソソームフラックス、小胞輸送、神経細胞の恒常性維持など、リソソーム関連経路と結び付いています。CLN5の機能喪失変異は、リソソーム蓄積病変と進行性の神経変性を特徴とする神経セロイドリポフスチン症と関連しており、CLN5はリソソーム機能障害の機序を研究するうえで重要な標的です。ヒト細胞モデルでは、CLN5の攪乱は、リソソーム酵素のプロセシング、カーゴのソーティング、蓄積物質の蓄積を解析するためによく用いられます。

CLN5 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CLN5 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CLN5内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CLN5の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CLN5が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。