CLC-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-405071

概要

CLCN1は、骨格筋の電位依存性塩化物チャネルCLC-1をコードしており、高い安静時塩化物コンダクタンスを提供することで、膜の再分極と電気的安定性を左右する重要な決定因子です。反復的な活動電位の発火を抑え、興奮性を調節することにより、CLC-1は正常な興奮収縮連関および筋線維の恒常性を支えます。CLCN1の活性は、電位、細胞内塩化物、ならびにチャネルのゲーティングを変化させるシグナル入力によって調節され、イオン輸送の生理学および代謝状態と結び付いています。CLCN1の病的変異や制御異常は、筋弛緩障害を特徴とするミオトニアおよび関連する神経筋表現型と強く関連しています。

CLC-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCLCN1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CLCN1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CLCN1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CLC-1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CLC-1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CLCN1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CLC-1の機能に不可欠なCLCN1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CLCN1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CLC-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびCLC-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CLCN1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CLC-1 HDRプラスミド（h）および CLC-1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCLCN1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCLCN1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。