claudin-9 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403166-ACT

CLDN9 kodiert Claudin-9, ein vierfach transmembranöses Tight-Junction-Protein, das zur Aufrechterhaltung der Integrität epithelialer Barrieren und zur selektiven parazellulären Permeabilität beiträgt. Als Bestandteil claudinbasierter Junction-Stränge koordiniert Claudin-9 die Zell-Zell-Adhäsion und die apikobasale Polarität und interagiert mit Junction-Scaffolds, die Tight Junctions mit der Aktin-Remodellierung sowie Programmen der epithelialen Differenzierung koppeln. Veränderte Claudin-Expressionsmuster sind häufig mit gestörter Barrierefunktion, Veränderungen der Gewebeorganisation und epithelial-mesenchymalen Phänotypen verbunden, die Invasions- und metastasebezogene Eigenschaften beeinflussen. CLDN9 ist daher relevant für die Untersuchung der Tight-Junction-Assemblierung, der epithelialen Morphogenese und krankheitsassoziierter Barriere-Dysregulation in humanen Zellmodellen.

claudin-9 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CLDN9-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

claudin-9 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CLDN9-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CLDN9-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen claudin-9-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CLDN9-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von claudin-9-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des claudin-9-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CLDN9-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.