Cks1 더블 틈내기효소 플라스미드 (h): sc-403019-NIC

인간 CKS1B 유전자는 Cks1을 암호화하며, Cks1은 보존된 사이클린 의존성 키나아제(CDK) 조절 서브유닛으로서 CDK 복합체를 SCF^SKP2 E3 유비퀴틴 리가아제 활성과 연결해 적절한 시점의 세포주기 전이를 촉진한다. Cks1은 p27^Kip1과 같은 CDK 억제인자의 유비퀴틴화 및 분해(턴오버)를 촉진함으로써, 증식 신호 하에서 G1/S 진행, DNA 복제 준비 상태, 그리고 체크포인트 회복을 조율하는 데 기여한다. CKS1B 발현 조절 이상은 단백질 항상성 변화와 비정상적인 증식 프로그램과 자주 연관되어 있어, 종양성 세포주기 조절과 유전체 안정성을 연구하는 데 중요한 표적이다. 그 결과 Cks1은 CDK 신호전달, 유비퀴틴 매개 분해, 그리고 복제 스트레스 반응을 연결하는 경로에서 흔히 분석되는 인자이다.

Cks1 더블 니카제 플라스미드(h)는 human 세포주 내 CKS1B 유전자좌의 고특이성 편집을 위해 설계된 쌍을 이루는 플라스미드로 구성됩니다. 각 플라스미드는 Cas9 D10A 니카아제와 CKS1B 내의 반대 DNA 가닥을 표적으로 하는 고유한 sgRNA를 발현합니다. 반대 DNA 가닥의 인접 부위로 유도될 때, 두 니카아제는 서로 어긋난 단일 가닥 절단 부위를 생성하며, 이는 함께 엇갈린 이중 가닥 절단을 유발하여 두 가이드의 조화된 표적 활성을 필요로 합니다. 이렇게 생성된 DNA 절단은 내인성 세포 복구 경로, 특히 비동형 말단 결합(NHEJ)을 통해 해결되며, 이는 CKS1B의 기능을 방해하는 삽입 또는 결실을 초래한다. 표적 부위에서 이중 sgRNA 결합을 요구함으로써, 이중 니킹 접근법은 편집 특이성을 향상시키고 표적 정밀도에 대한 추가적인 제어가 필요한 응용을 위한 보완적인 CRISPR 전략을 제공한다.

편집된 세포를 효율적으로 식별할 수 있도록, 한 플라스미드는 형광 시각화를 위한 GFP를 발현하며, 다른 플라스미드는 항생제 선별을 위한 푸로마이신 내성 유전자를 포함하고 있습니다. 이러한 기능들은 공동 형질 도입된 세포 집단의 효율적인 농축을 지원하며, CKS1B 기능이 손상된 클론의 검증을 단순화합니다.

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