CIDE-B Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403808-ACT

O CIDEB humano codifica a CIDE-B, um membro da família CIDE implicado na biologia das gotículas lipídicas, no manejo lipídico hepatocelular e na homeostase metabólica. A CIDE-B localiza-se em membranas associadas a gotículas lipídicas e tem sido relacionada a processos que coordenam o armazenamento de triglicerídeos, o equilíbrio da lipólise e o metabolismo energético em contextos relevantes para fígado e tecido adiposo. Alterações na expressão de CIDEB foram relatadas em estudos de dislipidemia, esteatose hepática e fenótipos mais amplos de doenças metabólicas, nos quais mudanças na dinâmica das gotículas lipídicas podem influenciar a sensibilidade à insulina e a sinalização inflamatória. Como um nó mecanístico que conecta vias de armazenamento lipídico a respostas de estresse celular, o CIDEB é frequentemente avaliado em modelos de remodelação metabólica e de acúmulo lipídico específico de órgão.

CIDE-B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CIDEB sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CIDE-B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CIDEB em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CIDEB, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CIDE-B. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CIDEB nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CIDE-B no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CIDE-B em células tumorais com expressão de CIDEB silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.