CHMP4C Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404325-ACT

CHMP4C codifica um componente central da maquinaria ESCRT-III, que remodela membranas nas etapas finais da triagem endossomal, da formação de corpos multivesiculares e da abscisão na citocinese. CHMP4C integra-se ao checkpoint de abscisão para ajudar a coordenar a separação final das células com a segregação cromossômica e a integridade do genoma, conectando a função do ESCRT à progressão mitótica e à sinalização associada a danos no DNA. A atividade desregulada do ESCRT-III pode perturbar a desregulação de receptores, o tráfego vesicular e a fidelidade da divisão celular — processos frequentemente estudados no contexto de tumorigênese e instabilidade cromossômica. Como resultado, CHMP4C é comumente investigado em vias que governam a cisão de membranas, o controle do ciclo celular e respostas ao estresse que influenciam fenótipos de proliferação e manutenção do genoma.

CHMP4C O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CHMP4C sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CHMP4C O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CHMP4C em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CHMP4C, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CHMP4C. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CHMP4C nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CHMP4C no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CHMP4C em células tumorais com expressão de CHMP4C silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.