Chitotriosidase Double Nickaseプラスミド (h): sc-402112-NIC

CHIT1 はヒトのキトトリオシダーゼ（chitotriosidase）をコードしており、主に活性化マクロファージやその他の骨髄系細胞によって産生される分泌型の糖加水分解酵素です。キチン様多糖を分解し、自然免疫防御に関与します。CHIT1 はリソソームおよびファゴリソソームの生物学、マクロファージ活性化プログラム、ならびに慢性炎症に伴う細胞外マトリックス関連のリモデリング過程と関連しています。CHIT1 の発現や活性の変化は、マクロファージ負荷や炎症状態の分子指標としてしばしば用いられ、CHIT1 の遺伝的多型はヒト集団における酵素機能に影響し得ます。その結果、CHIT1 は肉芽腫性疾患やリソソーム病（リソソーム蓄積症）、気道炎症とリモデリング、さらに組織恒常性の免疫代謝的制御に関するより広範な研究において重要です。

Chitotriosidase ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CHIT1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CHIT1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CHIT1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CHIT1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。