CH25H CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419641

概要

Ch25hはコレステロール25-ヒドロキシラーゼ（CH25H）をコードしており、CH25Hは小胞体に局在する酵素としてコレステロールを25-ヒドロキシコレステロールへと変換します。25-ヒドロキシコレステロールは、膜脂質組成やコレステロール恒常性の転写制御を調節するオキシステロールです。SREBPシグナル伝達などのステロール制御プログラムや、オキシステロール応答性の核内受容体とのクロストークを介して、CH25Hは脂質代謝、自然免疫シグナル伝達、炎症関連遺伝子発現に影響を及ぼします。マウスモデルでは、Ch25h活性がマクロファージの活性化状態、抗ウイルス制限経路、サイトカインネットワークの制御に関連することが示されています。オキシステロール産生の破綻は、代謝性炎症や免疫介在性の組織リモデリングの研究において重要であり、コレステロール取り扱いの変化が細胞のストレス応答やシグナル出力を形作り得ます。

CH25H CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるCh25h遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ch25h内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ch25hのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CH25Hタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CH25Hシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ch25h欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CH25Hの機能に不可欠なCh25hエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ch25hゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CH25H CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびCH25H CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ch25h遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CH25H HDRプラスミド（m）および CH25H HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCh25hホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCh25h標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。