CGRP2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401165-ACT

Das humane Gen **CALCB** kodiert das Calcitonin-Gen-verwandte Peptid 2 (**CGRP2**), ein Neuropeptid aus der Calcitonin-Genfamilie, das über den CGRP-Rezeptorkomplex (**CALCRL** zusammen mit **RAMP1**) signalisiert und dadurch cAMP-abhängige Signalwege reguliert. CGRP2 trägt zur neurovaskulären Kommunikation bei, indem es Vasodilatation, Gefäßtonus und entzündliche neurogene Signalgebung moduliert, und kann in peripheren Geweben die Reaktionen glatter Muskelzellen und von Immunzellen beeinflussen. Eine Fehlregulation der CGRP-Familien-Signalgebung wurde mit veränderter nozizeptiver Verarbeitung und der vaskulären Homöostase in Verbindung gebracht, wodurch **CALCB** ein relevantes Ziel für die Untersuchung der sensorischen Neuronenbiologie, des Endothel–Neuron-Crosstalks und entzündlicher Schmerzmechanismen ist. Bei Krebs und anderen chronischen Erkrankungen können Veränderungen der Neuropeptid-Signalgebung das Gewebemikromilieu und Stressantwort-Signalwege prägen, was die Untersuchung von **CALCB** in Modellen der Zell‑Zell‑Kommunikation unterstützt.

CGRP2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CALCB-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CGRP2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CALCB-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CALCB-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CGRP2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CALCB-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CGRP2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CGRP2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CALCB-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.