Plasmide CRISPR d'Activation (h) CGNL1: sc-405346-ACT

CGNL1 (cingulin-like 1) code une protéine d’échafaudage associée aux jonctions serrées, qui se localise aux contacts cellule–cellule des cellules épithéliales et endothéliales et contribue à organiser l’architecture jonctionnelle. Elle relie les complexes jonctionnels au cytosquelette d’actine et participe à la régulation de la fonction barrière, de la polarité et de l’assemblage des jonctions via des voies impliquant la signalisation des GTPases de la famille Rho et le remodelage du cytosquelette. En influençant la perméabilité paracellulaire et la signalisation dépendante des contacts, CGNL1 est pertinente pour l’étude de l’intégrité tissulaire, des perturbations de la barrière associées à l’inflammation et des signaux du microenvironnement qui orientent la migration cellulaire. Les altérations de la régulation jonctionnelle et de la dynamique du cytosquelette liées à la biologie de CGNL1 sont fréquemment étudiées dans des contextes tels que la transition épithélio-mésenchymateuse, la perméabilité vasculaire et les modifications d’adhérence associées au cancer.

CGNL1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CGNL1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CGNL1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CGNL1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CGNL1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CGNL1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CGNL1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CGNL1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CGNL1 dans les cellules tumorales présentant une expression de CGNL1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.