cGKII CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404138-ACT

PRKG2は、cGMP依存性プロテインキナーゼII（cGKII）をコードしており、膜関連型のセリン／スレオニンキナーゼとして、一酸化窒素（NO）‐cGMPシグナルを、イオン輸送、分泌、上皮バリア機能の生理を制御するリン酸化プログラムへと変換します。cGKIIはCFTRをはじめとする各種チャネル／トランスポーターを調節し、cGMP/PKGシグナル伝達と統合されることで、腸、腎、骨などの組織における細胞恒常性に影響を与えます。成長板では、PRKG2の活性が軟骨細胞の肥大分化を抑制し、軟骨内骨化を支持することから、この経路が骨格成長の制御に関与していることが示されています。PRKG2シグナルの制御異常は、発生期の骨表現型や、上皮機能および細胞シグナル伝達研究に関連するより広範なcGMP経路の変化と関連づけられています。

cGKII CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PRKG2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

cGKII CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PRKG2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPRKG2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性cGKIIの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPRKG2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるcGKII依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPRKG2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるcGKII経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。