CEP192 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-406971-ACT

CEP192 (proteína centrosomal 192) é um arcabouço conservado do material pericentriolar que organiza a maturação do centrossomo ao recrutar reguladores-chave da nucleação de microtúbulos, incluindo componentes do complexo em anel de γ-tubulina e quinases como PLK1 e AURKA. Ao coordenar a duplicação dos centríolos, a montagem do fuso e a segregação cromossômica precisa, a CEP192 sustenta uma progressão ordenada do ciclo celular durante a mitose. A ruptura ou desregulação da arquitetura do centrossomo e a amplificação associadas a vias dependentes de CEP192 são frequentemente relacionadas à instabilidade cromossômica, à aneuploidia e a alterações da capacidade proliferativa na biologia do câncer. Assim, a CEP192 humana é um nó útil para estudar a sinalização dirigida pelo centrossomo, a dinâmica do checkpoint mitótico e a organização de microtúbulos em células proliferativas.

CEP192 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CEP192 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CEP192 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CEP192 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CEP192, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CEP192. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CEP192 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CEP192 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CEP192 em células tumorais com expressão de CEP192 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.