CENP-F Lentiviral Activation Particles (h): sc-402178-LAC

CENPF kodiert CENP-F, ein großes, mit Zentromer und Kinetochor assoziiertes Protein, das sich in der späten G2-Phase anreichert und in der Mitose sein Maximum erreicht, um die Chromosomenausrichtung, die Signalübertragung des Spindelkontrollpunkts und die korrekte Trennung der Schwesterchromatiden zu koordinieren. CENP-F ist an der Dynamik der Kinetochor-Mikrotubuli-Anheftung beteiligt und verknüpft den mitotischen Fortschritt mit der Organisation der Kernhülle und der Mikrotubuli, wodurch geordnete Übergänge im Zellzyklus unterstützt werden. Eine veränderte CENPF-Expression ist häufig mit proliferativen Phänotypen und chromosomaler Instabilität assoziiert und ist daher relevant für Studien zu Aneuploidie, Genomstabilität und Tumorzellbiologie. In menschlichen Zellen beeinflusst eine Störung von CENP-F das Timing der Mitose sowie Wege der Chromosomenkongression, die in der Zellzyklus- und Krebsforschung häufig untersucht werden.

CENP-F Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente CENPF-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

CENP-F Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der CENPF-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen CENP-F-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen CENPF-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.